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時下最火的測序技術當屬單細胞測序，其中10x Genomics平臺無論從通量、成本、穩定性各方面來說都占據著很大的優勢。10x Genomics平臺基于微流控原理進行單細胞分選，對于上機樣本從質量及總量上，都有一定的要求，能否盡可能貼合上機要求往往就是實驗成敗的關鍵。今天小編就為大家整理了10x 單細胞測序各種測序策略上樣建議大全，干貨滿滿哦！10x Genomics 單細胞轉錄組 主要樣本類型新鮮細胞懸浮液 細胞重懸Buffer要求必須不含鈣鎂離子和EDTA，可使用DPBS或其它合適的緩沖液/培養基。 細胞數量要求1. 細胞總量：>10倍目標捕獲細胞數。2. 細胞濃度：須調整在700-1,200個細胞/μL濃度范圍內，以便樣品直接用于質檢和上機。 細胞質量要求1. 樣本中活細胞百分比率大于90%。經染色法細胞計數檢測結果判斷，人工計數使用臺盼蘭染料，細胞計數儀計數可使用AO/PI熒光染料活臺盼蘭染料。2. 無大于40 μm的細胞碎片、組織碎片、纖維灰塵等各類雜質，總雜質含量經估算應<5%�？墒褂�40 μm細胞濾網進行過濾除雜，雜質較多且細胞數充足前提下可進行多次過濾。3. 細胞呈單分散狀態，細胞結團率<5%。Buffer/培養基中添加BSA/血清可提供一定的抗結團作用，必要時應使用寬口吸頭進行輕緩吹打使細胞分散。4. 細胞懸浮液中不含逆轉錄抑制劑成分，不含游離核酸。將細胞由含鈣鎂離子或EDTA的Buffer/培養基轉入不含鈣鎂離子或EDTA的Buffer/培養基中時，應對細胞進行清洗和離心收集至少兩次，以保證干凈去除這些反應抑制劑和游離核酸；操作過程中應盡量保證細胞活性和縮短操作時間，避免細胞邊處理邊死亡造成游離核酸不斷釋放。 10x Genomics ATAC主要樣本類型新鮮細胞核懸浮液 細胞核重懸Buffer要求必須重懸于當天新鮮配制的Nuclei Buffer（官方提供）中。 細胞核數量要求1. 細胞核總量：>35,000個細胞核。2. 細胞核濃度：3,080-7,700個細胞核/μL。 細胞核質量要求1. 樣本中活細胞百分比率大于90%。經染色法細胞計數檢測結果判斷，人工計數使用臺盼蘭染料，細胞計數儀計數可使用AO/PI熒光染料活臺盼蘭染料。2. 無大于40 μm的細胞碎片、組織碎片、纖維灰塵等各類雜質，總雜質含量經估算應<5%。3. 細胞核呈單分散狀態，結團率<5%。4. 細胞核懸浮液中不含轉座反應抑制劑成分，不含游離核酸。對細胞核進行清洗時應注意離心條件的優化，避免造成細胞核數量損失；操作過程中應盡量輕緩和縮短操作時間，避免造成游離核酸不斷釋放。5. 使用高倍物鏡（40x 或60x）對所得細胞核進行觀察質檢，細胞核膜應無破裂，光滑圓潤。10x Genomics Feature Barcode蛋白組&轉錄組 主要樣本類型新鮮細胞懸浮液 細胞重懸Buffer要求必須不含鈣鎂離子和EDTA，可使用DPBS或其它合適的緩沖液/培養基。細胞數量要求1. 細胞總量：至少1.5x106個細胞。注意一般1x106個細胞對應抗體-核酸使用量為1 μg，另0.5x106個細胞用于細胞計數和活性檢測。2. 細胞濃度：需根據具體選用抗體-核酸的效價/用量，調節為適宜濃度。 細胞質量要求可參考上文10x Genomics 單細胞轉錄組細胞質量要求。 安諾單細胞測序技術總覽...
第七屆中國用戶體驗峰會將于2019年12月7日-8日在廣州匯華希爾頓逸林酒店召開，峰會暫定主峰會與七個分論壇。此次峰會，設有諾達思專場分論壇：創新行為學研究與用戶體驗分論壇。學界大咖、專家從行為學角度與您探討用戶體驗，誠邀您的參加！ 活動概況 1、時間：2019年12月7日-8日2、地點：廣州匯華希爾頓逸林酒店3、活動規模：1000人4、活動主題：高質量、新體驗、新經濟5、主辦單位：中國用戶體驗聯盟、中國電子質量管理協會6、承辦單位：中國用戶體驗聯盟華南分會7、協辦單位：工信部電子技術標準化研究院 擬定日程 12月7日 主峰會12月8日 分論壇 一、用戶體驗推動高質量發展論壇二、汽車論壇三、金融論壇四、創新行為學研究與用戶體驗論壇五、用戶體驗工具論壇六、交互式用戶體驗論壇七、服務設計論壇 諾達思專場→創新行為學研究與用戶體驗論壇 諾達思多年來致力于用戶體驗研究、積極開發用戶體驗創新研究工具，主要用戶體驗研究工具包括面部表情分析系統、多模態行為評價系統、眼動儀和腦電。諾達思咨詢采用神經營銷學工具，依據特有的Noldus Analytics分析平臺，可精確量化用戶的感覺層、認知層、行為層和記憶層相關數據，從而評估用戶體驗。平臺通過記錄眼動、腦電、行為、表情和訪談等數據，綜合評估用戶使用體驗，業務范圍涉及到產品、網站和App可用性測試。 特邀嘉賓 針對創新行為學研究與用戶體驗論壇，諾達思邀請了學界大牛及專家、教授，旨在與大家交流用戶體驗相關前沿動態。 Dr. Matthias Rauterberg 埃因霍溫科技大學全職教授、埃因霍溫科技大學工業設計系智能設計研究組主任、埃因霍溫科技大學工業設計系研究生院主任。 演講主題：基于潛意識行為的用戶體驗設計 張宜川 江蘇省醫療器械檢驗所副所長、技術負責人，研究員。全國醫用電器標準化技術委員會委員，全國醫用電子儀器標準化分技術委員會委員，醫療器械分類技術委員會有源手術器械專家組成員，醫療器械技術審評專家咨詢委員會成員，醫療器械檢測機構比對試驗專家組成員，中國合格評定國家認可委員會（CNAS）實驗室認可評審員，中國計量測試學會醫學計量分會常委。 演講主題：醫療設備用戶體驗及可用性測試 侯冠華 副教授，碩士生導師，同濟大學設計學博士畢業，寧波大學學術骨干， Autodesk公司用戶體驗設計外聘顧問。研究方向：人機交互用戶體驗，包容性設計研究，神經設計。目前主持教育部人文社科項目1項，浙江省自然科學基金1項。主持Autodesk Inventor軟件可用性國際用戶測試項目，近3年發表SCI/SSCI論文4篇，其中JCR一區期刊1篇，JCR二區期刊2篇。發表的SCI/SSCI論文在國際學術界有一定影響力，其中一篇SSCI論文被世界著名公立研究型大學拉夫堡大學博士學院選為寫作課示范材料。發表CSSCI論文5篇，EI檢索中文期刊論文1篇。 演講主題：應用眼動數據優化軟件界面設計——以Autodesk Inventor為例 楊朋翰 諾達思咨詢部經理。本科、研究生就讀于華東師范大學心理學院，國家二級心理咨詢師，用戶研究經驗涉及，金融類、工具類、直播類、AI硬件等。演講主題：從用戶小數據中尋找洞察 報名參會 1、電話：010-84852246-8092、郵件：[email protected]、微信公眾平臺后臺留言 ...
金開瑞定制抗體的IHC驗證圖 金開瑞專注于抗體定制多年，一站式的抗體服務、多樣性的宿主系統、規�；纳a、嚴格的質控標準，使得金開瑞的定制抗體穩定可靠，滿足客戶的應用需求，深受國內外客戶的歡迎。 一張漂亮的IHC圖是怎么誕生的？實驗過程中我們應該注意些什么呢？話不多說，直接上干貨，現在小編就跟大家分享IHC 實驗中可能出現的各種問題及應對策略，希望給科研君的實驗帶來實實在在的幫助~ 問題 原因 解決方案 邊緣效應 組織邊緣貼附不牢，邊緣組織松脫漂浮于液體中 APES/多聚賴氨酸處理玻片；組織切片盡量��；盡量避免選用壞死較多的組織 試劑未充分覆蓋組織 滴加試劑時讓試劑完全覆蓋組織 非特異性染色 抗體質量問題 使用質量有保證的抗體 抗體孵育時間長 減少孵育時間 抗體濃度過高 降低抗體濃度 一抗為多抗 使用單克隆抗體 內源性過氧化物酶及生物素 延長滅活時間 封閉不足 延長封閉時間 DAB孵育時間過久或濃度過高 按說明書配置試劑，鏡下控制反應時間 抗體孵育后洗滌不充分 每次孵育之后洗3*5次 實驗過程干片 及時滴加試劑 陰性結果 抗體濃度及質量 選擇有質量保證的抗體，先做預實驗摸索抗體使用濃度 抗原修復不足 摸索合適的抗原修復方式及修復時間 封閉時間過長 減少封閉時間 DAB孵育時間短 鏡下控制顯色時間 細胞通透不全，抗體未能進入細胞反應 選擇合適的通透劑及其反應時間 一抗二抗不匹配 選擇正確來源的二抗 脫片 玻片未處理好 玻片清洗干凈后用APES或多聚賴氨酸處理 切片厚薄不均勻 更換刀片；調整好切片機狀態 烤片時間或溫度不夠 60℃ 2小時 組織自身問題 腫瘤壞死組織及骨組織本身易脫片 抗原修復時溫度迅速變化 抗原修復后讓其自然冷卻 染色弱 抗體濃度低，孵育時間短 提高抗體濃度，延長反應時間 試劑使用超過有效期 試劑定時更新 滴加試劑時殘余緩沖液過多使試劑稀釋 滴加試劑前盡量減少殘余液體 封閉過度 減少封閉時間 著色不均勻 切片厚度不一致 更換刀片；調整好切片機狀態 劑配制未混勻使局部濃度不一致 試劑充分混勻后滴加 試劑未完全覆蓋組織 滴加試劑時讓試劑完全覆蓋組織 脫蠟不完全 更換脫蠟劑或延長脫蠟時間 ...
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